Epruvete de cartilaj histologic


Cercetare medicala Abstract Pierderea membrelor este un handicap devastator, iar în timp ce tratamentele curente oferă restaurare estetică și funcțională, ele sunt asociate cu complicații și riscuri. Soluția optimă ar fi valorificarea capacităților de regenerare ale organismului pentru a-și regăsi membrele noi. S-au încercat mai multe metode de regrupare a membrelor la mamifere, dar niciuna nu a reușit.

O astfel de încercare, la începutul anilor '70, a utilizat stimularea electrică și a demonstrat regenerarea parțială a membrelor. În ciuda acestor rezultate încurajatoare, această cercetare a fost întreruptă. Recent, a existat un interes reînnoit în studierea stimulării electrice, în primul rând la nivel celular și subcelular, iar studiile au demonstrat schimbări în comportamentul celulelor stem cu proliferare crescută, diferențiere, formare de matrice și migrare, toate importante în regenerarea țesuturilor.

Am aplicat stimulare electrică, in vivope epruvete de cartilaj histologic membrelor de șobolan amputate și am observat o formare nouă importantă de os, cartilaj și vas și prevenirea formării neuromului. Aceste descoperiri demonstrează că energia electrică stimulează regenerarea țesuturilor și constituie baza pentru cercetări ulterioare care duc la posibile noi tratamente pentru regenerarea membrelor.

Introducere Pierderea membrelor din cauza bolii, a traumelor și a deformărilor congenitale este un handicap devastator. Numai în Statele Unite, există aproape 1, 7 milioane de oameni care trăiesc cu pierderi ale membrelor și există aproximativ Tratamentele curente includ reamenajarea membrelor amputate, transferul țesuturilor autolog sub formă de clapete vascularizate sau nevasculate, dispozitive protetice și membrele transplantate de la donatori morți în creier 2, 3, 4, 5.

În timp ce aceste tratamente asigură diferite grade de restaurare estetică și funcțională, fiecare are propriile sale complicații și riscuri postoperatorii asociate analizate în 2. Aceste dezavantaje continuă să motiveze clinicienii și oamenii de știință să caute opțiuni de tratament mai bune. Soluția optimă ar fi valorificarea capacităților de regenerare existente ale corpului pentru a-și regăsi membrele noi.

Regenerarea, adică capacitatea de a readuce părțile corpului bolnave sau rănite la starea lor sănătoasă inițială, i-a fascinat pe oamenii de știință de vârstă revizuită în 6. Este cunoscut faptul că organismele multicelulare mai puțin complexe, cum ar fi bureții, cnidarienii și viermii plate sunt capabili să-și regenereze întregul organism și că această abilitate se pierde la vertebrele superioare revizuită în 7.

Adesea melanomul este înconjurat de o graniță inflamatorie roșie. Diagnosticul melanomului În prima etapă, medicul efectuează o examinare folosind o lupă sau un dispozitiv special - un dermatoscop.

Unele vertebrate, cum ar fi salamandrele, broaștele și peștele zebră pot regrupa țesuturi și organe parțiale sau complete 8. Cu toate acestea, capacitatea de regenerare a mamiferelor este limitată la câteva excepții, cum ar fi furniculele de cerb, falangele terminale în marsupiale și rozătoare și vârfurile degetelor distale la copiii mici 9.

Acest fapt acceptat în general, faptul că mamiferele nu se regenerează la membre, a fost contestat într-o serie de experimente efectuate la mijlocul anilor Cu toate acestea, aceste încercări timpurii nu au reușit să producă regenerarea membrelor la modelele de mamifere.

Epruvete de cartilaj histologic - Pobierz plik słownika - danielaroventafrumusani.ro

Mai recent, anchetatorii au încercat să aplice factori de creștere BMP2 și BMP7 și au raportat stimularea unei noi osificări endocondrale 11, O altă metodă, încercată la sfârșitul anilor și începutul anilor 70, a fost energia electrică de joasă tensiune. Înun chirurg ortoped, Robert Becker a publicat un articol de reper în revista Nature 13, în care a raportat că a indus regenerarea parțială a membrelor, într-un model de amputație a membrelor de șobolan, folosind stimulare electrică cu curent continuu de joasă tensiune DC.

Becker a bazat acest experiment pe un studiu anterior realizat de SD Smith, care a utilizat stimularea electrică pentru a induce regenerarea membrelor într-o specie de broască care nu se regenerează normal, Rana pipiens Libbin și colab.

Pornind parțial din această lucrare timpurie, stimularea electrică a fost ulterior dezvoltată și este utilizată pe scară largă astăzi în aplicații clinice pentru vindecarea rănilor dermice, pentru a promova regenerarea nervilor în sistemele nervoase periferice și centrale și pentru a trata o varietate de boli asociate osoase diferite, cum ar fi osteoporoza, osteoartroză, fracturi neunionale și pentru a promova integrarea biomaterialelor implantate în ortopedie revizuit în În ultimii ani, multe cercetări s-au concentrat pe dezvelirea mecanismelor de bază ale stimulării electrice ES la nivel celular și subcelular, folosind sisteme de model in vitro.

Acestea au arătat că ES influențează comportamentul celulelor stem și progenitoare, epruvete de cartilaj histologic proliferarea celulară, diferențierea, formarea matricei și migrarea.

epruvete de cartilaj histologic provoca inflamarea articulațiilor piciorului

Toate aceste funcții celulare sunt cunoscute pentru a juca roluri cheie în regenerarea țesuturilor revizuite în Spre deosebire de studiile in vitro menționate mai sus, în studiul de față am livrat stimularea electrică a curentului continuu DC de joasă tensiune la cioturile primelor membre de șobolan amputate și am folosit histologia și imunohistochimia pentru a evalua răspunsul de vindecare și regenerare rezultat. Rezultate Dispozitivele de stimulare electrică au fost bine tolerate de toate animalele din toate grupurile fără efecte secundare detectabile creștere sau pierdere în greutate, semne de vitalitate scăzută, infecție sau formare de tumori la evaluările din 7 și 28 de zile.

Trei animale au murit imediat în urma intervenției chirurgicale din cauza unor probleme cu anestezia. Formarea de noi țesuturi Răspunsul histologic în țesutul butuc distal de amputație este prezentat în Fig. Nu s-au observat semne vizibile de inflamație în niciunul dintre cioturile membrelor la momentul recoltării la 7 sau 28 de zile, independent de tratamentul primit.

În tulpini ale membrelor tratate ES, cavitatea măduvei osoase a rămas deschisă în ziua 7 și s-a închis cu o acumulare semnificativă de cartilaj și țesut osos la 28 de zile.

epruvete de cartilaj histologic calmante pentru durere în mușchi și articulații

Dimpotrivă, la controlul nestimulat și la cizmele de tâmpenie, s-a articulatii periferice un strat subțire de formare de țesuturi noi care acoperă cavitatea măduvei la locul amputării la 7 și 28 de zile. Nivelul aproximativ al locului de amputare este indicat cu linii punctate negre a — f. Rândul mijlociu este stimulat electric dșa e și butucurile de control f la 28 de zile de la amputație.

Formarea cartilajului semnificativă este văzută în secțiunea histologică g stimulată electric față de formarea cicatricilor în secțiunile de șanț h și de control j.

Epruvete de cartilaj histologic. Globule albe 0 1 2 la vedere

Imagine completă Au fost observate diferite stadii ale formării de țesuturi noi os și cartilaj în tulpini ale membrelor tratate ES.

La 2 animale s-au observat —1. La aceste epruvete de cartilaj histologic 4 animale, o zonă de creștere osteocartilaginoasă organizată a fost observată la vârful distal al ciotului, corespunzând lungimilor de creștere a țesuturilor noi, care măsoară 3, 5, 2, 5, 1, 5 și 1, 5 mm Fig. Rezerva, proliferarea și cartilajul hipertrofiat, calcifierea și osul nou format au fost vizibile în această zonă Fig. Formarea osteocartilaginoasă în tulpini stimulate electric albtiv gri și control negru la 7 a și 28 b zile după amputație.

Ingrosare vasculara sageti negre. Rezerva, cartilajul, proliferarea, hipertrofia, calcifierea și zonele osoase nou formate sunt vizibile.

  1. Tratamente împotriva cancerului de piele - Lipom
  2. Epruvete de cartilaj histologic - Fake Book 8
  3. Retete pentru dureri la genunchi si articulatii
  4. Artrita reumatoidă glucozamină condroitină
  5. Boli ale articulațiilor mâinilor în mâini
  6. Artroza tratamentului articulației piciorului
  7. Stadiul inițial al cancerului de piele: simptome, semne, fotografie - Teratom

Imagine completă Tulpiniile tuturor animalelor de control și tâmplă tratate cu rușine nu au avut depunere de cartilaj scor de 1 sau minim scor de 2iar cavitatea măduvei osoase la amputație a fost închisă la 7 și 28 de zile.

În ciotul de 1 șobolan tratat cu rușine, a fost detectată o cantitate mică de formare de oase scor de 2 în imediata apropiere a electrodului cu fir de argint.

epruvete de cartilaj histologic artroza degetelor provoacă tratament

Aspectul acestui os diferă de cel văzut în tulpini tratate cu ES, în locația sa și în absența formării osteocartilaginoase Fig. Formarea musculară nouă nu a fost observată în niciunul dintre cioturi, indiferent de tratamentul primit.

Formarea de noi vase Zonele de formare a noului vas în țesutul butuc distal de amputație au fost observate la tulpini de membre la 28 de zile Fig.

Diferența dintre cioturile tratate cu control și tâmpenie nu a fost semnificativă Fig. Formarea nervilor noi Nici o nouă formare de nervi nu a fost detectată în niciuna dintre cele trei grupuri.

Stadiul inițial al cancerului de piele: simptome, semne, fotografie

Cu toate acestea, la 28 de zile la animalele de control și tratate cu tâmpenie, am observat descoperiri histologice în concordanță cu formarea de neurom în țesut la capătul distal al ciotului. Aceste formațiuni au epruvete de cartilaj histologic sub formă de fascicule nervoase aranjate întâmplător Fig. În schimb, nicio astfel de formare de neurom nu a fost detectată în țesutul butuc tratat cu ES Fig.

Formarea neuromului săgețile în șaibă e și control f tulpini și nici o formare de neurom în țesutul butuc stimulat electric d 28 de zile după amputație.

epruvete de cartilaj histologic placă de tratament articular

La 28 de zile nu a fost detectată nicio diferență între cele 3 grupuri datele nu sunt prezentate. Câteva exemple în acest sens au fost documentate în literatura de specialitate. S-a demonstrat că perturbarea câmpurilor electrice normale în țesuturile care înconjoară tubul neural în timpul embriogenezei de pui provoacă deformări severe ale dezvoltării; o reducere a diferențelor de potențial transepitelial de scurtcircuite ale pielii și dă naștere la fluxul de curent accidentat care joacă un rol important în inițierea vindecării dermice; imediat după amputarea unui newt niveluri ridicate ale curentului electric emană de la ciotul amputat timp de zile, iar pe măsură ce nivelurile membrelor scad până la nivelurile de pre-amputație revizuite în Aceste observații subliniază rolul cheie pe care îl joacă semnalele electrice în reglarea dezvoltării țesuturilor, vindecarea și regenerarea La mijlocul epruvete de cartilaj histologic trecut, aceste observații i-au determinat pe cercetători să experimenteze aplicarea curentului electric pentru a stimula vindecarea și regenerarea oaselor, pielii, nervilor și chiar a membrelor întregi revizuite epruvete de cartilaj histologic 19, Aceste studii au condus la dezvoltarea mai multor tratamente clinice care asigură stimulare electrică externă pentru a îmbunătăți vindecarea și regenerarea oaselor, țesuturilor moi și măduvei spinării revizuite în 22, 23, Cu toate acestea, în ciuda acestor efecte pozitive observate în țesuturile individuale, regenerarea membrelor sau cifrelor întregi nu a fost încă indusă la mamifere.

În studiul de față am investigat efectele curentului electric continuu asupra regenerării membrelor întregi într-un model de amputație a membrelor de șobolan.

Epruvete de cartilaj histologic

Am selectat acest model, deoarece este cunoscut că un mamifer are capacitate de regenerare minimă după accidentare, asigurându-ne astfel că orice răspuns regenerativ observat s-ar datora curentului electric furnizat. În plus, am ales membrele de șobolan, deoarece este alcătuită din țesuturi compuse, astfel încât am putea studia efectul pe care stimularea electrică îl are asupra vindecării și regenerării la mai multe țesuturi împreună.

epruvete de cartilaj histologic vitamine pentru numele medicamentului pentru osteochondroză

În cele din urmă, acest model a fost utilizat și validat de alți investigatori în experimentele anterioare 16, 25, Utilizând modelul amputat al membrului de șobolan, am demonstrat că stimularea electrică a cauzat proliferarea celulelor la 7 zile, urmată de creștere osteocartilaginoasă semnificativă și formarea cartilajelor la 28 de zile. Această constatare, de asemenea, raportată de Becker și Libbin 15, 16, nu apare la vindecarea normală la mamiferele postnatale 27 și are în schimb aspectul creșterii organizate a țesutului observat într-un răspuns regenerativ.

Spre deosebire de această observație, epruvete de cartilaj histologic aflate în controlul nostru și tulpini de rușine au avut aspectul de țesut normal de vindecare, cu niveluri scăzute de osteogeneză și punte cu os la suprafața tăiată.

Această observație a fost, de asemenea, raportată de Becker Motivele acestor diferențe s-ar putea datora diferențelor la animale sau a procedurii de amputație chirurgicală, cu toate acestea, mai probabil sunt explicate prin metodele și echipamentele de analiză mai avansate pe care le-am folosit pentru a pregăti și analiza probele histologice.

Rezultatele noastre au arătat că stimularea electrică continuă crește semnificativ vascularizarea. Deși Becker sau Libbin nu au fost raportate, în studiile mai recente, această constatare a fost raportată de Ud-Din, S și colab. În plus, Bai și colab. În experimentele in vitro s-a constatat că stimularea electrică DC a indus un răspuns angiogenic epruvete de cartilaj histologic în celulele endoteliale vasculare, reglarea factorilor angiogeni prin activarea receptorilor VEGF Rolul cheie pe care îl are vascularizarea în multe procese fiziologice și patologice importante, inclusiv dezvoltarea și repararea oaselor, este bine documentat De fapt, absența unei cantități suficiente de sânge este o cauză majoră a vindecării osoase 31 și a neunirii Numai acest efect ar putea fi unul dintre principalii contribuitori la vindecarea îmbunătățită observată cu diferitele tratamente clinice folosind stimularea electrică revizuită în 22, 23, În studiul de față, în tulpini ale membrelor tratate cu ES, am observat că cavitatea măduvei osoase a rămas deschisă în ziua 7, în timp ce la animalele fictive și de control cavitatea a fost închisă cu un strat subțire de țesut nou în ziua 7.

epruvete de cartilaj histologic durere bruscă în toate articulațiile și mușchii

La 28 de zile măduva osoasă cavitatea de tulpini de ES a fost închisă cu epruvete de cartilaj histologic și țesut osos nou, în timp ce butoanele de control și tâmpi au avut același strat subțire de țesut văzut în ziua 7. Această întârziere la închiderea cavității măduvei în tulpini tratate ES ar putea sugera că ES contribuie la schimbarea echilibrului către proliferare și regenerare continuă versus formarea cicatricială văzută în tulpini tratate de control și tâmpenie.

Aceasta este o observație importantă pe care o vom urmări în studiile viitoare folosind acest model. O altă constatare importantă pe care am observat-o a fost inhibarea sau prevenirea formării neuromului în tulpini ale membrelor noastre tratate ES. Neuroamele sunt o îngroșare asemănătoare unei tumori a tulpinilor nervoase despărțite în regiunea unei cicatrici după amputare și se epruvete de cartilaj histologic că sunt cauzate de creșterea dezorganizată a cilindrilor axonici în țesutul de granulare proliferat.

Formarea neuromului inhibă regenerarea nervului după accidentare, iar la pacienții amputați poate provoca dureri severe, senzație de furnicături și pierderea semnificativă a funcției În țesutul cu tulpini de membre ale animalelor noastre fictive și de control, am observat o formare importantă de neurom, în timp ce în tulpini stimulate electric nu au fost detectate semne de formare de neurom.

Deși analiza noastră histologică a fost insuficientă pentru a determina mecanismul acestui efect, o posibilă explicație ar putea fi modularea paracrină a degenerescenței walleriene și răspunsul regenerativ general de către MSC. Acest lucru a fost recent descris de Gärtner, A și colab. Datorită potențialelor implicații clinice potențiale ale acestei constatări pentru tratarea pacienților amputați, urmărim activ acest efect al ES în studiile în curs de desfășurare în laboratorul nostru.

Această ipoteză este susținută de observațiile noastre in vivo și in vitro și de cele ale altora. In vivo am observat că țesuturile care au demonstrat cea mai mare cantitate de proliferare os, cartilaj, vase erau de origine MSC și EPC. In vitro am arătat că ES crește diferențierea osteogenă a MSC datele trimise spre publicare în altă parte. În cele din urmă, dovezi din ce în ce mai mari sugerează că MSC poate juca un rol important în regenerarea țesuturilor prin secreția factorilor trofici solubili care îmbunătățesc și ajută la repararea prin activarea paracrină a celulelor înconjurătoare.

Descoperirile preclinice și clinice au demonstrat că MSC are capacitatea de a migra către anumite site-uri de leziune sau regenerare, unde modulează tratamentul artrozei de șold cu peroxid de hidrogen imune și inflamatorii și mobilizează rezervoarele celulare intrinseci printr-o serie de mecanisme paracrine distincte În timp ce a fost dincolo de domeniul de aplicare al studiului de față pentru a determina efectul ES asupra MSC in vivoîn studiile viitoare, intenționăm să marcăm MSC la membrele de șobolan tratate ES și să măsurăm prezența și activitatea acestora.

Tratamente împotriva cancerului de piele

În concluzie, acest studiu a demonstrat că stimularea electrică de curent continuu de joasă tensiune promovează vindecarea și regenerarea țesuturilor specifice în modelul amputării membrelor noastre de șobolan.

Acest efect a fost cel mai accentuat în țesuturile osteocartilaginoase și vasculare. În plus, am observat inhibarea formării neuromului. În studiile viitoare, pentru a defini mai bine mecanismele de acoperire care provoacă efectele observate, intenționăm să identificăm expresia genică specifică și căile afectate de stimularea electrică în acest model. Aceste studii ne vor permite să înțelegem mai bine rolul ES în regenerarea membrelor mamifere și, în acest sens, contribuie la îmbunătățirea și extinderea utilizării sale în mediul clinic.

Pentru a evalua efectele stimulării electrice asupra regenerării țesutului membrelor, amputările drepte ale a 48 de șobolani Sprague Dawley Charles River Labs Int. Tabelul 1 prezintă tratamentul, numărul și distribuția animalelor. Tabel cu dimensiuni complete Dispozitiv de stimulare electrică Stimularea electrică ES a fost aplicată folosind un dispozitiv bimetalic construit în scopuri constând din electrozi din sârmă de platină și argint cu capetele lor proximale sudate cu laser la o rezistență de 10 MΩ Fig.

Electrodul de platină măsura 1, 3 cm lungime cu un diametru de 0, 15 mm, iar electrodul de argint avea 3 cm lungime cu un diametru de 0, 15 mm și avea o buclă legată la capătul liber Junker-Edelmetalle, Waldbüttelbrunn, Germania.

Imagine completă Amputarea membrelor și implantarea dispozitivului ES Înainte de operație, animalele au epruvete de cartilaj histologic antibiotice profilactice 0, 2 ml procainilină penicilină conținând 60 U. O incizie circumferențială a pielii a fost făcută pe partea anterioară, expunând osul humerus, care a fost tăiat folosind o tehnică de ghilotină cu foarfece chirurgicale de tăiere a osului de 1 cm proximală la articulația cotului, pentru a se asigura că nu interferează cu placa de creștere distală.

Dispozitivele de stimulare electrică Fig. La animalele ale căror tulpini ale membrelor au primit stimulare epruvete de cartilaj histologic grupa 1 dispozitivul ES și electrodul de argint au fost plasate în musculatura umărului drept al membrului amputat și fixate cu suturi la fascia deltoidă prin bucla electrodului de argint. Electrodul de platină a fost îndoit și introdus aproximativ 2 mm în cavitatea medulară a osului humerus la locul amputării.

Animalele fărâme grupa 2 au primit un singur fir de argint cu bucle lungi de 2, 5 cm, durerea tuturor articulațiilor din brațe a fost introdus 2 mm în cavitatea medulară și suturat proxim.

Membrele animalelor de control grupa 3 au fost amputate, dar nici dispozitiv, nici electrozi nu au fost implantate. În toate cele 3 grupuri, pielea a fost închisă peste ciotul membrelor cu o sutură intradermică continuă Prolene, Ethicon, Germania și animalele au primit antibiotice cu enrofloxacină postoperatorie Epruvete de cartilaj histologic, Bayer, Germania prin injecție intraperitoneală.

După operație, animalele au fost monitorizate până la recuperarea lor din epruvete de cartilaj histologic și zilnic pentru complicații sau semne de durere și disconfort. Animalele au fost adăpostite în cuști separate într-o lumină 12 ore lumină - 12 ore întunerictemperatură 20—24 ° C și cameră controlată cu flux de aer și li s-a oferit acces liber la alimente și apă.

Animalele au fost eutanasiate inhalare de CO 2 la 7 și 28 de zile după amputație și au cântărit. Tulpini ale membrelor au fost colectate și examinate macro și microscopic pentru semne de infecție sau tumori. Probele de tulpină a membrelor au fost fixate în Zinc-Formal-Fixx, Zinc-Formal-Fix x, Thermo scientific, SUA timp de 24 de ore și au fost stocate pentru analize histomorfometrice și imunohistologice ulterioare.